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分子生物学实验                                                   

1 基因克隆

技术服务形式:

A 客户提供cDNA文库我们负责设计并合成引物,钓取目的基因的cDNA克隆 

B 客户提供保质保量的组织或者细胞株

    我们负责提取总RNA,分离mRNA,RT-PCR              

    钓取目的基因的cDNA克隆                      

C 如果客户不提供上述任何材料

我们负责合成目的基因的全长cDNA克隆             

实验完成后提供完成的产品实物以及基因精确的书面测序报告和电子报告。

2 载体构建

    载体是把外源DNA(目的基因)导入宿主细胞,使之传代、扩增、表达的工具。载体有质粒(plasmid)、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒(粘粒)、病毒等。载体具有自我复制功能,有可选择的便于筛选、鉴定的遗传标记,有供外源DNA插入的位点,本身体积小等特征。

技术服务内容:为客户构建或改造特定的载体,将目的基因装载到特定的载体上。

合作方式:由客户提供目的基因。

实验完成后提供完成的产品实物以及基因精确的书面测序报告和电子报告。

周期:2周

3 RNA干扰载体的构建

技术服务内容:我们负责设计并合成shRNA Oligo,构建shRNA载体,并做DNA测序验证。

实验完成后提供完成的产品实物以及基因精确的书面测序报告和电子报告。

周期:2周

4 PCR、RT-PCR与荧光实时定量PCR

    PCR即聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情,用PCR几小时便可完成。PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑。

合作方式:我公司为客户做PCR反应,PCR产物电泳、测序。由客户提供引物和模板。

实验完成后提供产品实物基因精确的书面测序报告(电子报告)。

周期:5个工作日。

    RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。

合作方式:我公司为客户做RT-PCR反应,由客户提供引物和模板文库。

实验完成后提供产品实物基因精确的书面测序报告(电子报告)。

周期:10个工作日。

5 2D凝胶电泳分离组织蛋白表达谱

技术服务内容:建立并优化对该样品蛋白质2D-Gel电泳各项实验条件的技术参数。进行蛋白质2D-Gel电泳与结果分析。

合作方式:由客户提供蛋白质样品。

技术服务完成后向客户提供详细的实验报告。

6 DNA与cDNA文库构建

基因组DNA文库的构建:

    大分子基因组DNA的分离--插入片断的制备--插入片断连接载体--转化宿主菌--基因组文库的生成等。

cDNA文库的构建:

    总RNA提取、纯化--mRNA分离--cDNA制备--cDNA连接载体--连接产物转化宿主菌--cDNA文库效价测定--cDNA文库扩增--cDNA文库扩增后的质粒DNA纯化--纯化后cDNA文库质量的鉴定(如PCR和酶切鉴定等方法)等。

合作方式:客户提供足量新鲜的质量保证的组织。

实验完成后提供完成的产品实物以及详细的实验报告。

周期:2个月

7 DNA、RNA与蛋白质的提取、分离和纯化(从人、动物、植物和微生物中)

总DNA、RNA的提取

    为了研究DNA,RNA分子在生命代谢中的作用,常常需要从不同的生物材料中提取DNA或RNA.由于DNA,RNA分子在生物体内的分布及含量不同,要选择适当的材料提取DNA。

技术服务内容:为客户从各类组织、细胞中提取总DNA、RNA。

合作方式:由客户提供组织或细胞。
周    期:7天。

总蛋白提取

    蛋白质是生物体中含量最高,功能最重要的生物大分子.作为生命的物质基础之一,蛋白质在催化生命体内各种反应,调节代谢,抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用.因此,蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中,因些,可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。

技术服务内容:我们为客户从各类组织、细胞中提取总蛋白质。

合作方式:由客户提供组织或细胞。以便后续的检测使用。
周    期:7天。

8 载体转水稻/烟草

合作方式:客户提供正确序列的载体,我方负责转入水稻(烟草)。通过显色和测序检验转如是否成功。为客户节约大量培养时间,可以更充分的安排实验进程。

周期:3-4个月

提供的技术服务结果为:

(1) 基因转化成功的植株;

(2) GUS报告基因表达的显色照片;

(3) GUS报告基因转化成功的PCR检测结果。

9 DNA序列测定

    核酸的序列分析,即核酸一级结构的测定,是现代分子生物学中一项重要技术。测定DNA的核苷酸序列是分析基因结构与功能关系的前提。目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等,提出的双脱氧链终止法及Maxam和Gilbert提出的化学降解法,其中双脱氧链终止法是目前应用最多,最好的技术。

技术服务内容:为客户测定各类PCR产物、基因克隆、质粒、cDNA片段等的DNA序列。

合作方式:由客户提供上述样品或它们的转化菌株。
周    期:4个工作日。

10 原位杂交

11 分子生物学
12 启动子分析

13 实时荧光定量PCR

14 RIA(放射免疫法)技术服务

15 凝胶迁移或凝胶迁移率(EMSA)

16 其它

抗血清、多克隆抗体和单克隆抗体的制备

DNA与蛋白质的定点突变等

 
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